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解析鸡elisa检测试剂盒标准曲线做不好的原因

发布时间:2021-12-28   点击次数:1504次
  鸡elisa检测试剂盒标准曲线做欠好的原因分析,刚刚触摸Elisa实验,研讨鸡透明质酸(HA)相关目标的实验,做完鸡透明质酸(HA)实验后反应标准曲线的梯度都欠好。刚加完显色剂的时分梯度还算明显,但是显色比较浅,跟着时刻延伸(大约6、7分钟)往后梯度就不明显了。停止反应后测得的值梯度就没有了。
 
  为此,我公司技术员对鸡elisa检测试剂盒标准曲线做不好的原因做出分析:
  1、刚加完显色剂时梯度明显:显色液可能是从高浓度向低浓度孔加的;
  2、酶浓度太高,导致最终显色结果都是高的;
  3、包被-酶标系统不匹配或许酶标的非特异反应太强,或许酶标仪读数规划不够;
  4、样本中有可以催化底物的物质,没洗下来;
  5、建议:包被、酶标重新做梯度,先用较低的浓度把梯度探究好,然后再优化灵敏度,最终调出所需的灵敏度、线性规划;
  6、有条件的话,可以把酶免的蛋白系统移植到板式化学发光上,加完底物三分钟读数;
  7、蛋白系统灵敏度够的话,显色十分钟就差不多了;
  8、酶是自己标的这种情况的,HRP比例不要太高。
 
  完好的鸡elisa检测试剂盒首要包含:
  1、酶的底物;
  2、已包被抗原或抗体的固相载体;
  3、酶符号的抗原或抗体;
  4、结合物及标本的稀释液;
  5、洗涤液;
  6、阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参阅规范品和控制血清;
  7、酶反应停止液,常用的HRP反应停止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的终究体积而异,在板式ELISA中一般选用2mol/L。
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