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人白细胞介素17(IL-17)ELISA试剂盒-2022动态已更新

发布时间:2022-09-06   点击次数:891次


人白细胞介素17(IL-17)ELISA试剂盒-2022动态已更新

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实验原理


试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人白细胞介素17(IL-17)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白细胞介素17(IL-17)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。


 

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样本处理及要求


1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。


2.  血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。


3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。


4.  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。


注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。


 


需要而未提供的试剂和器材


1. 酶标仪(450nm)


2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL


3. 37℃恒温箱


4. 蒸馏水或去离子水


 


试剂盒组成


 


名称


96孔配置


48孔配置


备注


微孔酶标板


12孔×8条


12孔×4条



标准品


0.3mL*6管


0.3mL*6管



样本稀释液


6mL


3mL



检测抗体-HRP


10mL


5mL



20×洗涤缓冲液


25mL


15mL


按说明书进行稀释


底物A


6mL


3mL



底物B


6mL


3mL



终止液


6mL


3mL



封板膜


2张


2张



说明书


1份


1份



自封袋


1个


1个



备注:


1.  标准品浓度依次为:320、160、80、40、20、10 pg/mL


2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。


 


注意事项


1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。


2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。


3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。


4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。


5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。


6. 在储存和温育时避免强光直接照射。


7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。


8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。


9. 不能使用过期产品。


10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。


 


试剂准备


试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。


20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。


 


操作步骤


1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。


2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;


3.  样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。


4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。


5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。


6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。


7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。


 


实验结果计算


以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。


 


试剂盒性能


1.  检测范围:10 pg/mL – 320 pg/mL。


2.  灵敏度:检测浓度小于1.0 pg/mL。


3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。


 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15%


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