欢迎来到上海仁捷生物科技有限公司网站!
技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 鸭elisa检测试剂盒的技术流程主要分6步

鸭elisa检测试剂盒的技术流程主要分6步

发布时间:2022-07-25   点击次数:953次
  鸭elisa检测试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。
 
  鸭elisa检测试剂盒的计算:
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
 
  鸭elisa检测试剂盒的技术流程:
  1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
  2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。
  3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体0.05ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
  4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
  5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
  6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
Baidu
map