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小鼠β-联蛋白(β-Catenin)ELISA试剂盒检测原理

发布时间:2022-04-13   点击次数:947次

小鼠β-联蛋白(β-Catenin)ELISA试剂盒检测原理

 

实验原理:                                     

将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。


试剂盒操作步骤:

 

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实验所需自备试验器材:

1. 酶标仪(450nm

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3. 37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

实验结果计算:

 

绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

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技术小提示:

1. 当混合或重溶蛋白溶液时,尽量避免起沫。

2. 为了避免交叉感染,配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

3. 每次孵育时,请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4. 混合后的显色底物在上板前应为无色,请避光保存;假如微孔板后,将由物色变成不同深度的蓝色。

 

5. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致;加入终止液后,孔内颜色由蓝变黄;若孔内有绿色,则表明孔内液体未混匀;请充分混合。

 

产品有效期:6个月


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