人胸腺表达趋化因子ELISA检测试剂盒分析方法

人胸腺表达趋化因子ELISA检测试剂盒分析方法

ELISA试剂盒

标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断.

特点：灵敏性高、特异性强、重复性好.

试剂盒组成及试剂配制 

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 

2. 标准品（Standard）：6瓶。

3. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

4. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

7. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

8. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

4. 样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。

人胸腺表达趋化因子ELISA检测试剂盒分析方法

ELISA试剂盒操作注意事项：

1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作