技术：人（IL-6）ELISA试剂盒引用文献

发布时间：2021-04-28 点击次数：1198次

文献题目：CAR‑T 19 combined with reduced‑dose PD‑1 blockade therapy

for treatment of refractory follicular lymphoma: A case report

作者单位：天津第一中央医院血液科

引用试剂盒：

【RJ11850】人白细胞介素6（IL-6）ELISA试剂盒

Abstract

Anti‑CD19 chimeric antigen receptor T cell (CAR‑T) therapy has changed the typical outcomes of relapsed/refractory B‑cell leukemia and lymphoma. However, treatment effectiveness for patients with relapsed/refractory B‑cell non‑Hodgkin lymphoma has been less satisfactory compared with patients with B‑cell acute lymphoblastic leukemia. The present study described a case of refractory follicular lymphoma. A high expression of programmed cell death 1 (PD‑1) was measured on CD3+ T cells (80.90%) in peripheral blood samples obtained from the patient enrolled in this study, indicating that treatment with autologous CAR‑T 19 cell therapy may not be successful. Therefore, a therapy regimen consisting of CAR‑T 19 cells in combination with a reduced dose of nivolumab (1.5 mg/kg) for PD‑1 blockade was used. A low dose of PD‑1 blockade therapy was used to reduce the adverse effects associated with the combination of a PD‑1 inhibitor and CAR‑T 19 cells. This salvage therapy resulted in remission that lasted for >10 months.

Introduction

Although refined chemotherapy, including rituximab (an anti-CD20 monoclonal antibody), and autologous stem cell transplantation have improved the prognosis for B-cell non-Hodgkin lymphoma (B-NHL), patients with refractory B-NHL still have a poor prognosis (1,2). Approximately 19–26% of patients with follicular lymphoma (FL) receiving first-line immunochemotherapy with rituximab, cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisone (R-CHOP) experienced progression of disease within 24 months (2). Chimeric antigen receptor (CAR) T cells are a remedial treatment for these patients. Anti-CD19 CAR T cell (CAR-T 19) therapies have exhibited potent activity against numerous subtypes of B-NHL, including FL (3). Nivolumab, the human immunoglobulin G4 programmed death-1 (PD-1) immune checkpoint inhibitor antibody with high affinity to PD-1 receptors on T cells, could block their interaction with PD ligands 1 and 2 (PD-L1/PD-L2) and restore T-cell function (4). A significant association between the expression levels of PD-1 on T cells and the immunosuppression of T cells has previously been reported (5). A study that focused on the use of Nivolumab in a cohort of 10 patients with relapsed or refractory FL, reported the overall response rate was four patients (40%), and one achieved complete response (6). Meanwhile, PD-1 inhibitors may lead to an imbalance in immune tolerance and uncontrolled immune response, even fatal myocarditis (7). The present study describes a patient with successfully treated refractory FL, who received anti-CD19 CAR-T cells combined with decreased dose PD-1 inhibitor regimen.

抽象

抗CD19芯片抗原受体T细胞（CAR-T）疗法改变了复发/难治B细胞白血病和淋巴瘤的典型结果。然而，与B细胞急性淋巴细胞白血病患者相比，复发/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤患者的治疗效果较差。本研究描述了一例难治性卵泡淋巴瘤。在CD3+T细胞（80.90%）上测量了程序化细胞死亡1（PD-1）的高表达从本研究登记的患者那里获得的外周血液样本表明，使用自体CAR-T 19细胞疗法的治疗可能并不成功。因此，使用了由CAR-T 19细胞组成的治疗方案，结合PD-1fensuo的尼沃鲁马布（1.5毫克/千克）的减少剂量。使用低剂量的PD-1阻塞疗法来减少与PD-1抑制剂和CAR-T 19细胞组合相关的不利影响。这种抢救性治疗导致缓解，持续了 >10 个月。

介绍

虽然精炼化疗，包括利妥昔马布（抗CD20单克隆抗体）和自体干细胞移植改善了B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）的预后，耐火性B-NHL患者的预后仍然很差（1，2）。大约19-26%的卵泡淋巴瘤（FL）患者在24个月内（2）内接受了一线免疫化疗，包括利妥西马布、环磷酰胺、多索鲁比辛、维西汀和普利尼松（R-CHOP）。奇美抗原受体（CAR）T细胞是这些患者的补救治疗。抗CD19 CAR T细胞（CAR-T 19）疗法对包括FL（3）在内的许多B-NHL亚型表现出强大的活性。尼沃鲁马布，人类免疫球蛋白G4编程死亡-1（PD-1）免疫检查点抑制剂抗体与PD-1受体在T细胞上具有高度亲和力，可以阻止它们与PD配体1和2（PD-L1/PD-L2）的相互作用，并恢复T细胞功能（4）。此前有报道称，T细胞PD-1的表达水平与T细胞的免疫抑制之间存在显著关联（5）。一项研究侧重于在10名复发或耐火性FL患者中使用Nivolumab，报告总体反应率为4名患者（40%），其中1名患者实现了*反应（6）。同时，PD-1抑制剂可能导致免疫耐受性和不受控制的免疫反应失衡，甚至致命的心肌炎（7）。本研究描述了一名成功治疗耐火性FL的患者，该患者接受了抗CD19 CAR-T细胞以及减少剂量的PD-1抑制剂方案。

案例报告

2017年7月，一名70岁的女病人住进天津第一中心医院（中国天津），出现发烧和腰痛，持续了10天。进行了若干住院实验室测试。骨髓活检显示淋巴细胞发育不良，小细胞体，略不规则的细胞核和较厚的色度。活检固定为16-18小时，甲醛含量为10%，它由90毫升蒸馏水和40%甲醛10毫升组成，在室温下在Richman贴花溶液中孵育18-20小时，由8%盐酸40毫升和10%甲醛60毫升组成，并嵌入石蜡中。随后，用以下阻塞试剂切割和孵育了3μm薄的部分：过氧化物块（准备使用;猫。DS9263;莱卡微系统公司）或恩夫西翁 FLEX过氧化酶阻塞试剂（准备使用：猫。否。DM821;达科：安捷伦科技公司），室温为3-5分钟。根据制造商对以下抗原的协议，在室温下使用市售的主要抗体进行免疫化学染色20-30分钟：CD20（1：100;猫。RTU-CD20-7D1-QH;北京新奥医疗科技有限公司，CD138（1：100：猫号。RTU-CD138-QH;北京鑫奥医疗科技有限公司，PAX-5（1：100：猫不。PM-0111;上海瑞晶生物技术有限公司，CD10（1：100：猫号）CRM-0191;上海瑞晶生物技术有限公司）和 Bcl - 2 （1： 100; 猫。RTU-BCL-2-486-QH;北京鑫奥医疗科技有限公司）所有抗体都是在奥林巴斯光显微镜下观察到的，×100、×400和1000×放大。在骨髓形态（图1A-C）中观察到异常淋巴细胞。免疫化学的结果显示，样本为CD20 +，PAX5+，CD138+，CD10部分阳性和BCL2+ 。每100μl缓冲器中约有107个核细胞被补充。核细胞在黑暗中用人类 Fcr 阻塞试剂（稀释，准备使用; 猫。 130-059-901，米尔特尼生物tec GmbH）在黑暗中在 2 –8°C 10 分钟没有用于骨髓液样本的固定剂。根据制造商的协议，在室温下使用市售抗体进行染色15分钟：抗Skappa（准备使用;猫号349516;Bd 生物科学），反斯拉姆布达（准备使用; 猫号 349516;BD生物科学），CD19（准备使用;猫号130-113-647;米尔特尼生物特克有限公司），抗CD34（准备使用;猫号348053：Bd 生物科学），反 CD10 （准备使用; 猫。IM3633;贝克曼库尔特公司），反CD45（准备使用;猫号347463;BD生物科学），抗CD20（准备使用;猫号130-113-371：米尔特尼生物特克有限公司），抗CD5（准备使用;猫号651154：BD生物科学），抗FMC7（准备使用;猫号340919;BD生物科学），抗CD23（准备使用;猫号341007：BD生物科学）、抗CD71（准备使用;猫号347513、BD生物科学）和抗CD22（准备使用;猫号347573;BD生物科学）。使用贝克曼库尔特细胞伸缩流细胞仪进行流动细胞测量，使用 CytExpert 软件（版本 2.3.0.84）对细胞进行评估：贝克曼库尔特公司）。有7.6%的异常单克隆b淋巴细胞表示CD19+，CD20+，CD22+，FMC7+，CD23−，CD38−，CD71−，CD5−，CD10−，CD11c−通过骨髓流细胞学检测（无花果。 2）.天津中美诊断技术有限公司在骨髓（图1D）中分析，IgH/BCL2基因重新排列通过原位杂交（FISH）荧光检测出4.8%。MYD88-L265P基因检测呈阴性，由天津中美诊断技术有限公司直接测序检测为阴性。（图 1D）。正电子发射断层扫描计算断层扫描（PET-CT）检查显示，骨密度不均匀，部分骨质破坏。此外，PET-CT显示，骨代谢增加 [L3 椎体局部最大标准化吸收值（SUVmax）， 28.20; 双边颈部，右超血管福萨扩大淋巴结SUVmax，8.59]和软组织质量在左间质区域腰椎间2-3盘水平的新陈代谢增加（SUVmax，8.57：图3A）。患者被诊断为晚期IV FL，并治疗与利妥昔马布，环磷酰胺，多索鲁比辛，葡萄干和普利尼索龙（R-CHOP）的组合方案。经过六轮R-CHOP治疗后，患者出现全身无力、腰痛和间歇性腹痛。此时在骨髓中未观察到异常表型B淋巴细胞。PET-CT检查显示，骨骼新陈代谢增加，左代谢区域软组织质量下降：然而，腰椎1-5级的间质淋巴结密度增加（SUVmax，6.70：图3B）。PET-CT检查显示，中性淋巴结是新的淋巴瘤病变的最大概率。然而，患者有合并高血压和糖尿病，因此无法进行进一步的活检，以确认这一结果。此外，CD3+ T 细胞中 PD-1 的高表达（80.76%）通过流动细胞学从患者的外周血液样本中检测到。

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