测定意义:SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理:通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560nm处有吸收;SOD可清除O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。
需要的仪器,耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
样本处理
1. 细胞、细菌样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液, 超声波破碎(功率 20%或 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰 上待测。
2. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提 取液),进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3. 血清(浆)样本:直接检测。