测定意义:GSH/GSSG是细胞内重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。
测定原理:利用2-VP法测GSSG含量。
需要的仪器,耗材:低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
样本处理
(1)组织处理 新鲜组织首先用 PBS 冲洗 2 次,然后称取动物组织或者植物组织 0.1g。加入用试剂一润洗过的匀浆器中(匀 浆器提前放冰上预冷);然后加入 1mL 试剂一(组织/试剂一比例保持不变即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮 研磨效果更好);8000g,4℃离心 10min;取上清液放置于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保 存 10 天)。
(2)血液处理 血浆:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心 10 分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加入等体积的试剂一,4℃, 8000g 离心 10 分钟,将上清移入新的试管中放置于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。 血细胞:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心 10 分钟,弃去上层血浆用 3 倍体积的 PBS 清洗 3 次(用 PBS 重悬血 细胞,600g 离心 10 分钟),加入等体积试剂一,混匀后 4℃放置 10 分钟,8000g 离心 10 分钟,吸取上清放于 4℃ 待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。
(3)细胞处理 收集不少于 10 6个细胞,首先用 PBS 清洗细胞 2 次(PBS 重悬细胞,600g 离心 10 分钟),加入 3 倍细胞沉淀 体积的试剂一重悬细胞,反复冻融 2-3 次(可在液氮中冻结,37℃水浴中溶解),8000g 离心 10 分钟,收集上清于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。