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VB3含量检测,人维生素B3ELISA试剂盒科研

发布时间:2019-08-05   点击次数:1144次

VB3含量检测,人维生素B3ELISA试剂盒科研 

 

 

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人组蛋白H3(H3)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人组蛋白H3(H3)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

  1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
  2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
  3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
  4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
  5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
  6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
  7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
  8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
  9. 不能使用过期产品。
  10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

操作步骤

  1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.   设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3.   样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.   弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

 

1、液体类标本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等);

2、样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70℃保存;

3、请提前告诉我们:您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。

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