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口蹄疫O型抗体检测试剂盒(牛、羊、猪)

发布时间:2017-09-14   点击次数:1579次

【产品名称】

通用名:口蹄疫O型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia O(ELISA)

【包装规格】 96T×1/盒(注:酶标板不可拆)、96T×2/盒(注:酶标板一块可拆、一块不可拆)

【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑

本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫O型抗体,可用于口蹄疫O型疫苗免疫效果评价

【原    理】

    本试剂盒系由预包被口蹄疫O型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液酶标记物及其他配套试剂组成,应用阻断酶联免疫法(ELISA)原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫O型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育,样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原,阻断抗原与板的结合;经洗涤后,再加抗体工作液孵育;经洗涤后加入酶标记物孵育;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有口蹄疫O型抗体。

【试剂盒组成】

序号

名称

规格(96T×1)

规格(96T×2)

1.

酶标板

96T×1

96T×2

2.

酶标记物  (红盖)

5.5ml×1

11ml×1

3.

抗体工作液 (蓝盖)

5.5ml×1

11ml×1

4.

抗原液 (黑盖)

5.5ml×1

11ml×1

5.

20X浓缩洗涤液

40ml×1

40ml×2

6.

底物液A  (白盖)

6ml×1

11ml×1

7.

底物液B  (黑盖)

6ml×1

11ml×1

8.

终止液  (黄盖)

6ml×1

11ml×1

9.

阳性对照  (红盖)

1.0 ml×1

1.5 ml×1

10.

阴性对照  (绿盖)

1.0 ml×1

1.5 ml×1

11.

盖板膜

1张

2张

12.

自封袋

1个

1个

13.

说明书

1份

1份

   

储存及有效期】 于2~8℃避光保存,有效期为12个月。

包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。

2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

3.用已稀释的洗涤液将待检牛、羊血清按64倍稀释(如5μl血清加入315μl洗涤液中,混匀),待检猪血清按32倍稀释(如5ul血清加入155洗涤液中,混匀),阴、阳性对照不用稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl,样品孔每孔加入稀释后的样品50μl;每孔再加入抗原液50μl(空白孔除外)。

  注:加入抗原后牛、羊样本稀释比例相当于1:128,猪样本稀释比例相当于1:64。

4.震荡混匀10秒,置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加抗体工作液50μl(空白孔除外),置37℃反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔加酶标记物50μl(空白孔除外),置37℃反应30分钟。

9.洗涤,同步骤5。

10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应15分钟。

11.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照A值≥1.0,阳性对照A值≤50%×阴性对照A值。

【检验结果的解释】

1.PI(阻断率)=(1-样本A值/阴性对照孔平均A值)×100%,PI≥50%为阳性;PI<50%为阴性。

2.本实验检测牛、羊血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫O型抗体,且效价高于1:128,达到保护水平;反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫O型抗体,或效价低于1:128,未达到充足保护水平。

3.本实验检测猪血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫O型抗体,且效价高于1:64,达到保护水平;反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫O型抗体,或效价低于1:64,未达到充足保护水平。

4.如需了解样本抗体的zui终效价,可将样本进行梯度稀释,使PI≥50%的zui高稀释比例即为该样本抗体的zui终效价。

【试验方法的局限性】

    该试验仅作为定性牛、羊、猪血清中口蹄疫O型抗体,根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以*溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

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